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Tsukino Talent Productions に所属する 4 つのグループ、SolidS、Growth、SOARA、QUELL が、2021 年サマーカーニバルに向けて準備を進めている。2 日間にわたるこのイベントのクライマックスは、すべてのユニットが参加する合同ライブだ。会場の特徴的なレイアウトと規模を考慮し、各グループは新たな楽曲と振付を創作する。これが、Tsukipro The Animation の第 2 弾で始まる、熱狂的な新たなシーズンの幕開けとなる。

武道館で開催される「Tsukino Concert」は、ツキノエンターテインメントプロダクションのトップアイドルグループが華々しく登場する年次イベントである。各ユニットのリーダーである、SolidSのShiki Takamura、SOARAのSora Oohara、QUELLのShuu Izumi、GrowthのKouki Etouは、フェスティバルの2日目に披露する独自の新作楽曲制作を任される。 ShikiはSolidSの楽曲制作にインスピレーションを見出せず苦戦する。Soraにとっては、過去の過ちを乗り越え、SOARAを頂点へと導くことが不可欠だ。Shuuは過去の名声から脱却すべく、かつての所属グループに匹敵する人気をQUELLで築こうと奮闘する。一方、Growthはデビュー前にライバルであるZIXとコラボレーションすることになり、その状況にKoukiは居心地の悪さを感じている。 『Tsukipro The Animation』は、これら4つのユニットの物語を織り交ぜ、Tsukino Concertに向けた日々の練習や準備の様子を描き出す。

ミリドニアの拡大する野望と、聖フィリアを崇拝するセレンファレンの宗教的熱狂に挟まれた小国の唯一の姫、アニ・イナコは、セレンファレンでの条約調印式に参加し平和を築こうと旅立つ。まっすぐな外交訪問を予想していたが、対立する両国から現れた特異な王子たちの出現により、その期待は打ち砕かれる。条約により三国が正式に統一される中、アニと王子たちは根深い対立を乗り越え、かつて分断された土地同士に共通の理解と真の絆を築いていく。